При пробирочном способі в пробірку наливають точно відведені 4 мл 3% розчину хлориду натрію і вливають туди кров (1 піпетку від гемометра ГС-3), піпетку промивають розчином. Перед підрахунком гумову трубку знімають зі змішувача, кінці його затискають між великим і середнім пальцями і сильно струшують не менше 2 хв. Потім випускають з кінчика змішувача дві краплі на бік, а третій заповнюють заздалегідь підготовлену лічильну камеру (див. Камери рахункові). На чисто вимиту і витерту камеру накладають чисте шліфоване покривне скло так, щоб краї його спиралися на дві бічні виступаючі смужки камери. Ковзаючим пересуванням покривного скла притирають його до камери так, щоб з обох сторін з'явилися райдужні кільця або лінії. Потім заповнюють камеру через щілину між камерою і покривним склом; якщо кров брали у змішувач, то до щілини підносять невелику краплю на кінчику змішувача; якщо кров брали у пробірку, то після струшування пробірки в неї опускають скляну паличку і переносять висячу краплю.
 Рис.3. Схема підрахунку еритроцитів у великому квадраті. Пунктир зі стрілкою вказує порядок пересування по малих квадратах (в рахунок включають тільки еритроцити, зафарбовані чорним). |
Через 1 хвилину, коли еритроцити осядуть, виробляють підрахунок їх у темному полі мікроскопа при об'єктиві 40 X і окулярі 7х (або об'єктиві 8 X і окулярі 15 X). Сосчитывают еритроцити на площі п'яти великих квадратів, пересуваючись по горизонтальних рядах малих квадратів і включаючи в рахунок еритроцити, що лежать всередині квадрата і на двох прикордонних лініях - лівої і верхньої або правій і нижній (рис. 3). Знайдене число множать на 10 000 і отримують число еритроцитів в 1 мм3.
Для підрахунку лейкоцитів вибирають змішувач, має над ампулою мітку «11». Кров насасывают до мітки «0,5», а потім 3% розчин оцтової кислоти, підфарбований до яскраво-блакитного кольору розчином метиленового синього, до мітки «11». Камеру заповнюють після струшування змішувача протягом 1 хвилини і випускання двох крапель, так само як для еритроцитів. Підраховують лейкоцити на площі 100 великих квадратів (мінімум 50). У сітці Горяєва зручно вважати на всіх неразграфленных квадратах (їх 100) в тому ж порядку, як і при підрахунку еритроцитів. Найбільш відповідне збільшення - об'єктив 8х, окуляр 10Х. Результат підрахунку множать на 50. У приладах, які здійснюють автоматичний підрахунок формених елементів крові, робота проводиться з прикладеним до них інструкцій.
Знаючи кількість гемоглобіну і кількість еритроцитів, вираховують кольоровий показник крові. Це умовна величина, що показує ступінь насичення еритроцита гемоглобіном. Нормальний кольоровий показник умовно прийнятий за 1 (див. Гиперхромазия, гипохромазия). Щоб обчислити кольоровий показник, якщо кількість гемоглобіну виражена в грам-відсотках, треба три перші цифри грам-відсотків гемоглобіну помножити на 3 і розділити на дві перші цифри числа еритроцитів (або тільки на першу, якщо еритроцитів менше 1 000 000). Приклад: гемоглобіну 10,2 г%; еритроцитів 3 400 000 в 1 мм3; кольоровий показник (10,2x3)/34 =30,6/34 = 0,9.
Якщо кількість гемоглобіну виражено в одиницях, то ділять число одиниць на подвоєні дві перші цифри числа еритроцитів.
Для підрахунку лейкоцитарної формули готують пофарбовані мазки крові. Предметні скла знежирюють, пропалюючи їх на газовому пальнику або витримуючи в суміші спирту з ефіром. Кінцем предметного скла доторкаються до виступила з місця уколу маленькій краплі крові і відразу ж роблять мазок. Для цього край шліфованого скла, більш вузький, ніж предметне, ставлять попереду краплі крові під кутом 45° (рис. 2,7), відводять його назад до зіткнення з краплею (рис. 2,2), дають їй розтектися по краю шліфованого скла і ковзаючим рухом проводять цим краєм з предметного скла так, щоб кров потягнулася за ним і розмазалася тонким шаром (рис. 2,3).
 Рис. 4. Вид правильно зробленого мазка крові. |
Мазок повинен вийти напівпрозорим, жовтим, рівномірним, покриває 2/3-3/4 предметного скла (рис. 4). Після висихання на ньому пишуть грифельным олівцем або кутом іншого скла прізвище хворого. Мазки фіксують зануренням у метиловий спирт на 3 хв., або в суміш 96% етилового спирту і ефіру (порівну) на 20-30 хв., або в 96% етиловий спирт на 30 хв. і забарвлюють за методом Романовського - Гимзы. Барвник є сумішшю кислого (еозин) і основний (азур-П) фарб. Сутність цієї фарбування полягає в тому, що клітини крові і їх частини в залежності від реакції середовища в них фарбуються по-різному, що дозволяє їх розрізняти. Продажний барвник розводять з розрахунку 1-1,5-2 краплі барвника на 1 мл нейтральної дистильованої води.
Картина крові при різних методах фарбування. Рис. 1. Забарвлення мазків нейтральним червоним і янусом зеленим по Сейбин. Рис. 2. Суправитальная забарвлення мазків яскравим крезиловым синім. Рис. 3. Забарвлення тілець Гейнца метиленовим фіолетовим. Рис. 4. Забарвлення мазків по Крюкову та Паппенгейму. Рис. 5. Забарвлення мазків по Лейшману. Рис. 6. Забарвлення мазків по Гімзе. Рис. 7. Забарвлення мазків еозин-метиленовим блакитним по Травню - Грюнвальду. Рис. 8. Забарвлення мазків по Нохту - Максимову. Рис. 9. Забарвлення мазків карболфуксинметиленовым синім по Фрейфельд для виявлення патологічної зернистості. Рис. 10. Оксидазная реакція за методом Вінклера - Шультце. Рис. 11. Пероксидазна реакція за методом Грема. Рис. 12. Одночасна забарвлення ретикулоцитів і тромбоцитів за Алексєєву.
